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血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但是由于血清成分十分復(fù)雜，直至今天，血清中的所有成分仍未wan全分析出來，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而發(fā)生改變。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。
牛血清的區(qū)別
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)。可以劃分為：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清。
? 胎牛血清（Foetal Bovine Serum，簡稱FBS）：胎牛血清是指懷孕3-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未wan全的胎牛心臟密閉穿刺采血后，通過一系列工藝處理最終獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育wan全這些因子會自動消失。
? 新生牛血清（Newborn Calf Serum，簡稱NBCS）：出生14小時內(nèi)未進(jìn)食的新生牛，通常采用頸動脈采集血液分離得到的血清。
?小牛血清(Calf serum, CS)：取自出生后3天至6個月的健康小牛，動脈采血分離血清；
?成牛血清（Adult Bovine Serum，簡稱ABS）：取自健康的成年牛，收全血后分離得到血清。
胎牛血清是品質(zhì)相對較高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分最少。
某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。使用濃度一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。
牛血清的保存
未拆封的牛血清，一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃，在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用，若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi)，再放回冷凍。
牛血清在放入冷凍環(huán)境前，建議瓶中預(yù)留一定的體積空間，避免血清凍結(jié)后體積增大，撐破包裝瓶，形成污染。
牛血清的使用
將牛血清從冷凍冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融，或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。wan全溶解后建議盡快使用，若長時間儲存在2-8℃，血清中的各種（脂）蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。
牛血清的沉淀處理
牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜。
解凍牛血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。
牛血清中的“黑膠蟲"
在細(xì)胞培養(yǎng)的時候，有時會在400倍顯微鏡下看到小黑點(diǎn)在動，小黑點(diǎn)有時呈點(diǎn)狀，有時呈小的片狀，運(yùn)動形式為在原地振動，類似布朗運(yùn)動，這種小黑點(diǎn)既不是細(xì)菌、霉菌，也不是支原體，目前業(yè)內(nèi)人士稱其為“黑膠蟲"。
黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。黑膠蟲一般是存在血清里的，而血清通常是經(jīng)過0.1μm濾膜過濾的，所以血清里不可能存在細(xì)菌、霉菌及支原體等微生物。如果說黑膠蟲不是生物，它會不斷增多，達(dá)到一定數(shù)量時會與細(xì)胞競爭性生長，與細(xì)胞競爭培養(yǎng)基中的營養(yǎng)，從而使得細(xì)胞營養(yǎng)不足而死亡。
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